一种基于单限制性内切酶的无痕克隆方法
Posted On 4月 29, 2021
0
3.9K Views
DNA组装是合成生物学最重要的技术之一,是将多个DNA片段物理连接在一起的过程。通过将较短的DNA片段端到端连接成较长的序列,可以在连接到克隆载体之前构建较长的DNA片段集合。
传统上,DNA组装被限制在可以组装的短长度的DNA上,并且该过程可能涉及涉及多种酶的许多复杂步骤,这可能非常耗时和昂贵。
牛津大学的学者发明了一种新的分层DNA组装方法,与传统方法相比,该方法具有许多优势。它可以组装长达200kb的片段,并在整个过程中使用一种限制性酶。它还产生“无疤痕”的组装,由此片段之间的连接没有从DNA组装过程中留下不需要的人工产物。
DNA克隆是合成生物学的基石,是将多个较小的DNA片段物理连接成一个大片段的过程。
- 传统制度的限制
使用IIS型限制性内切酶的传统DNA克隆系统需要两种或多种酶来分级组装大型DNA构建体。这个过程特别复杂和昂贵,因为要克隆的DNA片段需要没有所用酶的限制性位点。现有的基于IIS限制性内切酶的DNA组装系统也会在组装的DNA中留下不需要的“疤痕”序列。人们普遍需要一种DNA克隆方法来解决这些限制,并提高组装更大序列的DNA的能力。
- 单一限制酶系统
牛津大学的学者开发了一种新的分层克隆DNA片段的方法,这种方法比传统方法更简单,同时产生更长的组装片段,可能没有“疤痕”序列。
该方法的其他优点包括:
- 在DNA克隆的不同阶段使用单一的限制性内切酶,这减少了设计阶段要避免的限制性内切酶的数量
- 可以克隆超过200kb的片段
- 在模块化DNA组装中重复使用克隆零件的更多自由
- 使用一组通用装配载体的分级无瘢痕克隆选项
- 传统克隆的简单高效替代方法
Trending Now
2023年春晖杯人才项目宁波行活动开始报名啦!
12月 12, 2023
浙江泓基新能源科技有限公司招聘产品总监
12月 12, 2023